猫骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

摘要

目的 探讨分离和培养猫骨髓内皮祖细胞(EPC)的方法,为研究干细胞治疗人角膜内皮失代偿提供理论依据.方法 采用密度梯度离心法从猫骨髓中分离出单核细胞,接种到纤维蛋白(Fn)铺层的培养皿中.检测不同质量浓度的Fn铺层及不同培养液DMEM和EGM-2对细胞生长的影响.EPC与乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)和荆豆凝集素(UEA-1)孵育,免疫荧光检测CD133和CD34.结果 EPC呈铺路石样生长.提高Fn质量浓度并不提高细胞贴壁数.细胞呈长梭形.50%以上的EPC能摄取DiI-ac-LDL,并结合UEA-1.第10d EPC的CD133和CD34表达率为90%,第14d时分别下降到80%和70%.结论 从猫骨髓中成功分离和培养出内皮祖细胞,形态上与猫角膜内皮细胞相似,有望作为种子细胞用于治疗角膜内皮失代偿.