原发性开角型青光眼小梁细胞的体外培养及其生物学特性

摘要

背景原发性开角型青光眼（POAG）是一种常见致盲性眼病，其特点是房水外流阻力增加导致眼压增高。位于房水外流通道的小梁网调节房水的外流，因此研究小梁网细胞的生物学特性有着重要的意义。目的探讨POAG小梁细胞体外培养的方法及其生物学特性。方法经小梁切除术收集8例开角型青光眼患者患眼的带小梁网的深层巩膜组织块进行体外原代和传代培养，用鼠抗人层黏连蛋白（LM）单克隆抗体、兔抗人纤维连结蛋白（FN）单克隆抗体、鼠抗人神经元特异性烯醇化酶（NSE）单克隆抗体进行免疫组织化学检测以对传代细胞进行鉴定，在透射电子显微镜下对传代细胞的超微结构进行观察，并将传代小梁细胞的生物学特性与本研究组前期培养的正常小梁细胞进行比较。结果组织块培养10d左右，可见细胞从其边缘向外生长。传代细胞在4d内处于对数生长期，其后进入平台期，第7天细胞基本融合。第3代POAG小梁细胞及正常人眼小梁细胞中可见FN、LM和NSE均呈阳性表达，证实传代细胞为小梁细胞，而空白对照组细胞未见FN、LM和NSE表达。第3代POAG小梁细胞和正常小梁细胞中FN的A450值分别为0．354±0．06和0．26±0．01，LM的A450值分别为0．34±0．03和0．25±0．02，差异均有统计学意义（FN：t=14．446，P=0．001；LM：t=9．346，P=0．001）。与正常小梁细胞比较，第3代POAG小梁细胞表面的微绒毛、细胞质的溶酶体及吞噬小泡含量减少。结论采用组织块培养法可成功在体外培养POAG小梁细胞，该研究结果为研究青光眼的发病机制提供了细胞学基础。