α-GalCer活化的自然杀伤T细胞对高危角膜移植后排斥反应的防治作用

摘要

背景角膜移植排斥反应是导致角膜移植手术失败的主要原因，抑制角膜移植排斥反应的各种药物均有不良反应。研究发现自然杀伤T（NKT）细胞可致器官移植患者免疫耐受，但目前有关NKT细胞用于治疗高危角膜移植免疫反应的研究较少。目的探讨体外α-GalCer活化的NKT细胞在防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法无菌条件下取Lewis大鼠脾脏淋巴细胞，加入质量浓度为100mg／L的α-GalCer，在RPMI1640培养基培养1周后，流式细胞仪分选出NKT细胞（密度为5×106个／m1）。取10只Fisher344大鼠为供体，20只Lewis大鼠为受体，受体角膜移植前1周角膜缝线诱导角膜新生血管（CNV）。将受体大鼠按照随机数字表法随机分为NKT细胞组和生理盐水组，每组各10只。Lewis大鼠行穿透角膜移植。NKT细胞组在手术结束时球后注射0．1mlNKT细胞液，生理盐水组注射相同体积的生理盐水。术后裂隙灯下观察记录角膜植片的反应情况并按照Holland的标准进行评分。术后第14天，两组各获取3只大鼠角膜植片行组织病理学检测，采用免疫组织化学法检测角膜植片中CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的浸润情况。结果生理盐水组角膜植片平均存活时间为（7．90±1．37）d，NKT细胞组为（14．70±1．49）d，差异有统计学意义（t=10．61，P=0．00）。术后2周，生理盐水组角膜植片重度混浊水肿，大量炎性细胞浸润，新生血管长入植片，而NKT细胞组角膜植片仅轻度混浊、水肿，炎性细胞明显少于生理盐水组。免疫组织化学检测可见，生理盐水组角膜植片中大量CD4＋和CD8＋T淋巴细胞浸润，NKT细胞组中CD4＋和CD8＋T淋巴细胞明显减少。流式细胞仪检查结果表明，NKT细胞组大鼠脾脏中NKT细胞百分数为（5．67±0．25）％，明显高于生理盐水组的（1．21±0．19）％，差异有统计学意义（t=8．43，P=0．00）。结论α-GalCer活化的NKT细胞球后注射可以明显延长大鼠高危角膜移植植片的存活时间，为角膜移植排斥反应的防治提供了新的手段。