姜黄素对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

摘要

背景姜黄素是从姜的根茎中提取的物质，可抑制多种内皮细胞和上皮细胞的增生，但其抑制视网膜色素上皮（RPE）细胞增生的作用及机制鲜见报道。目的研究姜黄素对体外培养的人RPE细胞增生的抑制作用及机制。方法第5代人RPE细胞株接种于96孔板，分别加入5、10、15、20mg／L姜黄素分别作用24、48和72h，未加入姜黄素的作为对照，采用水溶性四氮唑-1（WST-1）检测各组人RPE细胞的增生情况和细胞活性（A值）；采用流式细胞术检测姜黄素作用后RPE细胞的凋亡率、坏死率和不同细胞周期的细胞比例；透射电子显微镜（TEM）观察细胞超微结构的变化；采用Westernblot法检测RPE细胞中促凋亡因子p53、p21WAF1/CIPI和增生细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达。结果WST-1检测显示，随着姜黄素质量浓度的增加，人RPE细胞的』4值逐渐降低，差异有统计学意义（Fm质量浓度=96．55，P=0．00）；随着姜黄素作用时间的延长A值逐渐增加，差异有统计学意义（FH目=4634．28，P=0．00）。流式细胞术检测表明，15mg／L姜黄素作用48h早期凋亡细胞率为（13．37±1．26）％，明显高于对照组的（7．03±0．37）％，差异有统计学意义（t=8．33，P=0．00），姜黄素作用72h，早期凋亡细胞率及中晚期凋亡细胞率分别为（15．97-＋0．16）％和（0．26-＋0．03）％，明显高于对照组的（7．29±0．37）％和（O．14±0．02）％，差异均有统计学意义（t=37．80、7．44，均P=0．00）。15mg／L姜黄素作用48h后人RPE细胞处于G。／G，期细胞比例为（57．17±1．17）％，明显低于对照组的（67．73±1．10）％，差异有统计学意义（t=11．40，JP=0．00）。姜黄素作用后人RPE细胞可见线粒体肿胀和空泡样变性。Westernblot检测显示，15mg／L姜黄素作用24、48、72h后p53和p21WAF1/CIPI蛋白相对表达值均明显高于对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05），而15mg／L姜黄素作用24、48、72hPCNA蛋白的相对表达水平明显低于对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论姜黄素可有效抑制体外培养的人RPE细胞增生，其抑制作用呈剂量和时间依赖性，其作用机制可能与p53信号通路有关。