胶质源性神经营养因子对体外培养的人腺样囊性癌细胞增生和迁移的影响

摘要

背景嗜神经侵袭是泪腺腺样囊性癌（ACC）有别于其他泪腺肿瘤最重要的生物学特征，胶质源性神经营养因子（GDNF）在涎腺ACC嗜神经侵袭中发挥了重要的作用，但GDNF对ACC细胞生物学功能的调控作用尚需进一步探讨。目的研究GDNF对体外培养的人ACC-2细胞增生和迁移能力的影响，为进一步明确ACC的神经侵袭机制提供实验依据。方法将ACC-2细胞系在含质量分数10％胎牛血清（FBS）、100u／mI（商品单位）青霉素、0．1g／L链霉素的RPMI-1640培养液中进行常规培养和传代，取对数生长期的ACC-2细胞制成单细胞悬液以2x104个／ml的密度接种于96孔板中，实验组加入终质量浓度分别为20、60、80、100、120μg／L的GDNF，对照组为仅含10％FBS的RPMI-1640培养液。细胞培养48h后，用免疫组织化学法检测ACC-2细胞中GDNF蛋白的表达，MTT法检测不同质量浓度GDNF作用不同时间后人ACC-2细胞的吸光度（A。）值；用Transwell小室法检测不同质量浓度GDNF作用不同时间后迁移的ACC-2细胞数目。结果免疫组织化学法检测表明，GDNF可在ACC-2细胞的细胞质中表达。标准培养48h后，随着GDNF质量浓度的提高，ACC-2细胞A”D值明显增加，各组间的差异有统计学意义（F=3．336，P=0．026）。与对照组比较，各质量浓度GDNF组ACC-2细胞A。值均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。80μg／LGDNF作用后，随着培养时间的延长，ACC-2细胞A570值逐渐增加，差异有统计学意义（F时间=39．979，P=0．000），各时间点GDNF组间ACC-2细胞A570值均明显高于对照组，组间总体比较的差异有统计学意义（F组别=13．212，P=0．003）。GDNF作用细胞30h后，随着GDNF质量浓度的增加，ACC-2细胞迁移数量明显增加，差异有统计学意义（F=144．886，P=0．000）。用100μg／LGDNF培养24、30、40h，随着培养时间的延长，ACC-2细胞系迁移数量明显增加，且各时间点GDNF组细胞迁移数均明显多于对照组，差异均有统计学意义（F目目=46．747，P=0．000；F组别=63．786，P=0．000）。结论GDNF可以促进体外培养的人ACC-2细胞的增生和迁移能力，并且分别具有剂量和时间依赖性。