血小板源性生长因子-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2表达的影响

摘要

背景目前在青光眼的治疗研究中，血小板源性生长因子-BB（PDGF—BB）作为直接作用于小梁网的药物手术刀正处于研究中，期望药物成分能直接作用于小梁网，在不破坏正常房角生理结构的前提下，疏通小梁网房水流出通道，从而达到降眼压的目的。目的探讨PDGF—BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶．2（MMP-2）表达的影响及其意义。方法取新鲜牛眼球的小梁组织，以组织块培养法培养小梁细胞，通过形态学观察和神经元特异性烯醇化酶（NSE）染色对培养的细胞进行鉴定。将第3代小梁细胞接种于6孔培养板，在培养基中加入不同质量浓度（0、5．0、12．5、25．0μg／L）的PDGF-BB培养2h，分别采用逆转录PCR（RT—PCR）法和免疫组织化学法观察PDGF—BB对牛眼小梁细胞MMP．2mRNA（相对值）和蛋白在小梁细胞中的表达水平，分析各组培养细胞中阳性信号的吸光度（A）值。结果牛眼小梁组织块培养5～9d时可见细胞游出，第3代小梁细胞可见较多突起，细胞核居中，NSE染色细胞基质中呈绿色荧光。RT—PCR检测结果发现，0、5．0、12．5、25．0Ixg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2mRNA／β-actin的A值分别为0．127-＋0．026、0．147-＋0．045、0．178-＋0．053和0．222±0．062，差异有统计学意义（F=56．71，P〈0．05），其中5．0、12．5、25．0μg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2mRNA表达量明显高于0μg／LPDGF—BB组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测发现，0、5．0、12．5、25．0μg／LPDGF—BB组小梁细胞中MMP-2蛋白表达量（A值）分别为446．12±13．81、1444．65±54．64、2086．18±73．18和3488．65±25．98，差异有统计学意义（F=213．12，P〈0．01），各组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论在体外培养的条件下，PDGF—BB可促进牛眼小梁细胞中MMP-2的表达，其作用呈剂量依赖的方式。