Wnt3a诱导人晶状体上皮细胞细胞外基质合成和胶原凝胶收缩的机制研究

摘要

背景晶状体上皮细胞（LECs）的细胞外基质（ECM）的产生、异常沉积和收缩是PCO发生的重要病理机制。Wnt3a蛋白参与机体组织上皮细胞ECM的产生和纤维化过程，但Wnt3a对晶状体组织中上皮间质转化（EMT）相伴行的ECM的产生和收缩的影响尚不清楚。目的研究Wnt3a对体外培养的人LECsECM合成的影响，并探讨其介导胶原凝胶收缩的相关分子机制。方法用脂质体介导转染技术将Writ3acDNA表达载体瞬时转染人LECs系SRAOI／04细胞作为Wnt3a转染组，对照组转染pcDNA3-HA表达载体。细胞转染后48h，采用Westernblot法测定各组细胞中Wnt3a、ECM主要成分I型胶原纤维（Col-I），Ⅳ型胶原纤维（C01．IV）和整合素B1（integrinp1）的表达；采用免疫荧光法检测α-SMA、细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）在胞中的表达和分布。将SRAOI／04细胞与I型胶原凝胶混合，观察胶原收缩情况。结果Wnt3a转染48h，SRAOI／04细胞内Writ3a蛋白相对表达量（相对灰度值）明显升高，对照组细胞和Wnt3a转染组细胞中Wnt3a蛋白表达量分别为0．290±0．066和0．703±0．105，差异有统计学意义（t=5．782，P〈0．01）。Westernblot法检测显示，Wnt3a转染组SRAOI／04细胞中的Col-I和integrinp1蛋白的相对表达量分别为0．697±0．021和0．875±0．055，明显高于对照组的0．370±0．020和0．580±0．030，差异均有统计学意义（t=19．600、8．156，均P〈0．01），Wnt3a转染组Col—IV蛋白相对表达量为0．430±O．020，高于对照组的0．383±0．031，但差异无统计学意义（t=2．514，P〉0．05）。免疫荧光检测显示，对照组细胞中F-actin和α-SMA蛋白主要表达于细胞膜，而Wnt3a转染组细胞中F-aetin和α-SMA蛋白表达于细胞膜、细胞质和细胞核周围，阳性染色程度较对照组明显增强。Col-I凝胶收缩试验结果显示，细胞与Col-I胶原凝胶混合后24h凝胶收缩面积比率明显低于混合后8h（64．1％±2．3％与98．9％±1．0％），Wnt3a转染组凝胶收缩面积比率明显低于对照组（64．1％±2．3％与93．9％±3．1％），差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论Wnt3a过表达可诱导SRA01／04细胞ECM合成和细胞骨架重建，促进细胞收缩。