Src激酶抑制剂CGP77675对TGF-β1诱导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用

摘要

目的探讨Src激酶抑制剂CGP77675（CGP）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人视网膜色素上皮（RPE）细胞上皮－间质转化（EMT）过程的作用及其机制。方法将培养的人RPE细胞株（ARPE19）分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1＋CGP处理组，并根据分组用相应药物处理细胞。细胞体外培养后3 d于光学显微镜下观察各组细胞的形态变化；分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法和免疫荧光染色法检测各组细胞中EMT相关基因及其蛋白的表达变化，包括细胞中纤溶酶原激活物抑制蛋白-1（PAI1）和纤连蛋白-1（FN1）的相对表达量及上皮细胞中闭锁小带蛋白1（ZO1）和细胞骨架蛋白F-肌动蛋白（F-actin）的分布；采用MTT法检测各组细胞的增生率；采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力。结果对照组ARPE19细胞呈上皮样形态，F-actin和ZO1沿细胞膜表达；TGF-β1处理组细胞为纤维样，F-actin表达的排列紊乱，细胞膜上ZO1表达不连续。TGF-β1＋CGP处理组细胞维持上皮样形态，F-actin和ZO1表达清晰且完整。对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1＋CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F＝33.14、82.92，均P〈0.01），对照组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量为0.211±0.080和0.116±0.073，TGF-β1＋CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量分别为0.368±0.097和0.362±0.048，均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。3个组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F＝181.90、48.85，均P〈0.01），对照组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.166±0.055和0.327±0.066，TGF-β1＋CGP处理组FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.143±0.030和0.260±0.077，均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。细胞处理后3 d，TGF-β1＋CGP处理组细胞增生率为（79.30±3.44）%，与对照组的（99.50±1.00）%和TGF-β1处理组的（95.10±4.20）%比较均明显下降，差异均有统计学意义（均P〈0.01）；处理后7 d，TGF-β1＋CGP处理组细胞增生率为（54.80±7.39）%，明显低于TGF-β1处理组的（92.10±4.50）%和对照组的（99.10±0.50）%，差异均有统计学意义（均P＝0.004）。细胞划痕试验显示，TGF-β1处理组细胞迁移能力明显增强，TGF-β1＋CGP处理组划痕宽度无明显变化。结论Src激酶抑制剂CGP能够抑制由TGF-β1诱导的ARPE19细胞EMT，提示Src信号通路与EMT过程有关。