HIV派生的MicroRNA99致巨噬细胞焦亡及机制的研究

摘要

目的 探讨HIV派生的MicroRNA99（miRNA99）对巨噬细胞焦亡的影响及机制。方法 用佛波酯（PMA）刺激人单核白血病细胞（THP-1）分化成贴壁的巨噬细胞,流式细胞术测定细胞表面CD11b；将鉴定好的细胞分组,分为PBS组（空白对照）、LPS＋ATP组（阳性对照）、miRNA99组（实验组）；将miRNA99 mimics转染至细胞,采用Western blot（WB）方法测定活化caspase-1蛋白水平；采用ELISA法测定细胞上清液IL-18、IL-1β的水平；将巨噬细胞细胞又分为2组,miRNA99＋TLR8 RNAi质粒组实验组、miRNA99＋空质粒组,转染细胞,在共聚焦下观察细胞内荧光；采用WB方法检测TLR8蛋白及活化caspase-1蛋白水平；用ELISA法测定TLR8沉默后细胞培养上清液中IL-18、IL-1β的水平。结果 经PMA刺激24 h后细胞贴壁生长,伸出伪足,表面CD11b阳性率在99%以上。LPS＋ATP组与miRNA99组活化caspase-1蛋白水平、上清液中IL-18、IL-1β的含量明显高于对照组（P＆0.05）,差异有统计学意义。转染TLR8 RNAi质粒后巨噬细胞内呈现绿色荧光,WB显示实验组TLR8蛋白表达明显减少。在TLR8质粒＋miRNA99组,活化caspase-1蛋白水平及上清液中IL-18、IL-1β的含量明显低于空质粒＋miRNA99组（P＆0.05）,差异有统计学意义。结论 HIV派生的miRNA99能诱导巨噬细胞发生焦亡,miRNA99诱导焦亡的机制有TLR8途径的参与。