耐甲氧西林金黄色葡萄球菌诱导巨噬细胞焦亡的机制研究

摘要

cqvip:目的观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响,探究MRSA诱导巨噬细胞焦亡的作用机制。方法采用脂多糖(LPS,100 ng/ml)与尼日利亚菌素(nigericin,Ng,10 mmol/L)或三磷酸腺苷(ATP,3 mmol/L)联用或MRSA单独刺激的方式构建细胞焦亡模型;通过细胞形态学观察以及乳酸脱氢酶(LDH)检测,评价细胞膜完整性以及细胞毒性;采用ELISA法测定细胞培养液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎症因子的表达水平;采用Western印迹法检测细胞培养上清以及细胞内胱天蛋白酶(caspase)-1和IL-1β蛋白表达水平;采用慢病毒短发夹RNA(shRNA)干扰BMDM内相关炎症小体感受器分子表达,检测MRSA诱导细胞焦亡的信号通路。结果LPS分别与Ng或ATP联用时能破坏BMDM细胞膜完整性,上调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.01),以及caspase-1和IL-1β成熟形表达水平(P<0.01);MRSA单独刺激能产生细胞毒性,诱导炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平显著升高(P<0.01),并提高caspase-1和IL-1β成熟形在培养基中释放水平(P<0.01);在BMDM细胞内敲除NLRP3或NLRC4基因表达后,MRSA诱导的IL-1β表达量下降(P<0.01)。结论MRSA可能通过NLRP3炎症小体或NLRC4炎症小体诱导BMDM细胞焦亡。