潮霉素抗性HBV包装细胞系的构建

摘要

目的 配合HBV载体的研究 ,为HBV载体提供包装。方法 HBV全基因经删除包装信号ε区后 ,插入到潮霉素抗性pMEP4载体 ,转染HepG2 细胞系 ,用潮霉素筛选形成细胞克隆。检测表达HBsAg及HBcAg较多者作为HBV包装细胞系 ,进一步转染稳定表达复制缺损型HBV的质粒 ,PCR方法观察上清液中病毒的形成。结果 包装细胞系高表达HBsAg和HBcAg ;携带重组HBV的G4 18抗性重组逆转录病毒感染潮霉素抗性包装细胞系后 ,经两种抗生素同时筛选 ,在细胞培养上清液中能检出突变型HBV ,未检出野生型HBV。结论 删除了包装信号的HBV次全基因 ,失去了形成完整HBV颗粒的能力 ,但能为复制缺损型HBV提供包装所需的结构蛋白。