流式细胞术检测骨髓微量神经母细胞瘤细胞在临床中的应用

摘要

目的 建立神经母细胞瘤(NB)患儿骨髓(BM)微量肿瘤病灶(MRD)的检测方法,分析其结果与预后的关系.方法 应用CD45FITC/CD81 PE/CD56PECy5单抗组合通过流式细胞术(FCM)检测人NB TGW细胞株的免疫表型,并确定本实验室FCM的敏感度;比较Ⅲ～Ⅳ期NB患儿治疗前及治疗中BM细胞形态学观察与FCM检测BM中的CD45-/CD81+/CD56+细胞阳性率,分析病程中MRD检测与预后的关系.结果 ①TGW细胞株表达CD56和CD81,不表达CD45,本实验室FCM敏感度为1×10-4.②58例患儿共144份标本中BM细胞形态学观察分析提示BM转移者23份,FCM检测显示表达CD45-/CD81+/CD56+细胞的标本数62份,BM细胞形态学观察和FCM法阳性检出率差异有统计学意义(P＜0.01).③比较平均化疗4个疗程后BM MRD结果与预后关系:31例患儿初诊时BM MRD检测阳性,化疗4个疗程后11例患儿BM MRD转阴,随访至今无复发及进展,无瘤生存率(DFS)中位时间23个月;另20例患儿化疗4个疗程后BMMRD仍为阳性,其中11例患儿复发或进展,包括1例死亡,两组差异有统计学意义(P＜0.01).④化疗后移植患儿外周血干细胞(PBSC)采集前BM MRD结果与预后的相关性:共有19例患儿接受化疗后行PBSC移植,14例患儿采集PBSC时BM MRD为阴性,其中2例患儿复发,自移植后始DFS中位时间9个月;5例患儿采集PBSC时BM MRD为阳性,均复发,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 运用FCM检测NB患儿BM MRD敏感度高、特异性强,可协助NB患儿的诊断和评估临床疗效,BM MRD残留与NB预后相关.