沉默miR-141对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及Sirt1/Nrf2信号通路的影响

摘要

目的研究沉默miR-141表达对肾小管上皮细胞损伤的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养肾小管上皮细胞HK-2并分为:正常（5.5 mmol/L D-葡萄糖）组、高渗组、高糖（30 mmol/L D-葡萄糖）组、阴性对照+高糖组（转染NC inhibitor质粒）和si-miR-141+高糖组（转染miR-141 inhibitor）。miR-141和Sirt1 mRNA相对表达量用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）进行检测。DCFH-DA荧光染色、CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞中活性氧（ROS）生成量、细胞存活率和凋亡率。Sirt1/Nrf2信号通路相关蛋白的表达量用Western blot法检测。荧光素酶报告基因实验验证miR-141和Sirt1 mRNA之间的靶向关系。结果①与正常组相比,转染si-miR-141后,细胞miR-141相对表达量降低（1.00±0.03 vs 0.52±0.06）,差异有统计学意义（F=278.104,P＆0.05）;②与正常组[DCFH-DA荧光强度（7.18±0.59）%]相比,高糖组[DCFH-DA荧光强度（84.95±3.21）%]细胞ROS水平明显升高,而与高糖组相比,si-miR-141+高糖组[DCFH-DA荧光强度（45.10±4.29）%]细胞ROS水平明显降低,差异有统计学意义（均P＆0.05）;③与正常组（5.13%±0.78）%和高渗组（5.96±0.81）%相比,高糖组（32.76±2.95）%细胞凋亡率显著增加,而si-miR-141+高糖组（17.54%±2.79）%细胞凋亡率则较高糖组和阴性对照+高糖组（33.40%±3.14）%显著降低,差异有统计学意义（F=221.419,P＆0.05）;④与正常组（100±3.98）%和高渗组（95.68±5.14）%相比,高糖组（67.24±5.18）% HK-2细胞存活率显著降低;同时,与高糖组（67.24±5.18）%和阴性对照+高糖组（65.33±3.10）%相比,si-miR-141+高糖组（83.55±5.10）%细胞存活率显著增加,差异有统计学意义（F=93.008,P＆0.05）;⑤与正常组和高渗组相比,高糖组Cleaved caspase 3蛋白表达量升高,同时Sirt1、Nrf2和HO-1蛋白表达量下调;然而,与高糖组相比,si-miR-141+高糖组中Cleaved caspase 3蛋白表达量降低,同时Sirt1、Nrf2和HO-1蛋白表达量升高,差异有统计学意义（均P＆0.05）。结论下调miR-141表达能通过激活Sirt1/Nrf2信号通路改善高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激损伤。