基质金属蛋白酶9高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

摘要

目的观察基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase 9,MMP 9）高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,以阐述其在糖尿病足伤口愈合中的可能机制。方法本研究在中山大学孙逸仙纪念医院内分泌专科实验室完成。大鼠皮肤成纤维细胞与高糖（22 mmol/L）+高同型半胱氨酸（100μmol/L）联合孵育建立体外MMP 9高表达细胞模型,另设正糖（5.5 mmol/L）孵育对照组。Realtime PCR、ELISA和明胶酶谱法检测MMP 9 mRNA、蛋白表达量及活性,流式细胞仪检测细胞增殖功能,CCK-8检测细胞活力,ELISA法检测细胞胶原（羟脯氨酸）分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力。计量数据以均数±标准差（x±s）表示,两组间均数的比较采用成组t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果与对照组比较,MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞的MMP9 mRNA、蛋白表达量及活性,分别升高6.05倍、4.12倍和1.58倍（P＜0.01）;与此同时MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例、增殖指数、细胞活力、胶原（羟脯氨酸）分泌量、6 h横向迁移率和纵向迁移细胞数,分别下降29.8%、18.1%、23.3%、68.7%、45.0%和21.4%（P＜0.01）。结论 MMP 9高表达的皮肤成纤维细胞增殖减慢、活力下降、迁移和胶原分泌能力降低,提示MMP 9可能抑制成纤维细胞的生物学行为。