癌胚抗原启动子调控的白细胞介素-2／干扰素β融合基因的原核及真核表达质粒的构建

摘要

目的根据细胞因子间协同作用特点,构建人白细胞介素-2（IL-2）与干扰素（IFN）β的融合基因,并用癌胚抗原（CEA）基因启动子调控其在结肠癌细胞株中的靶向表达。方法分别用原核及真核表达载体,检测融合蛋白的表达情况。PCR、RT-PCR法扩增得到CEA启动子、IL-2 cDNA、IFNβ cDNA,应用原核表达质粒pGEX-5X-1、真核表达质粒pcDNA3．1／HisA、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1,构建出原核表达质粒和真核表达质粒;SDS-PAGE电泳检测原核表达;用脂质体法将真核表达质粒转入结直肠癌细胞株 Lovo（CEA高表达）、HT-29（CEA低表达）和对照Hela细胞（CEA阴性）,转染后分别以流式细胞仪、荧光显微镜、Western印迹等方法检测肿瘤细胞凋亡情况及蛋白表达情况。结果融合基因可在大肠杆菌及肿瘤细胞内表达融合蛋白;对肿瘤细胞有明显的杀伤作用;由CEA启动子调控的融合基因在Lovo细胞的表达高于HT-29细胞,在CEA阴性的Hela细胞中几乎不表达。结论 CEA启动子可靶向性调控融合基因在肿瘤细胞的表达,具有协同作用的细胞因子融合蛋白可能有更强的抗肿瘤作用。