两种GAD65片段与IL-4基因共表达DNA疫苗的构建与鉴定

摘要

目的 构建两种谷氨酸脱羧酶(GAD)65片段与白细胞介素4(IL-4)基因共表达DNA疫苗,并在体外COS-7细胞中对表达产物进行检测.方法 从GAD 65质粒中扩增出GAD190-315和GAD490-570两个片段的cDNA,Overlap法分别与hIL-2信号肽cDNA基因拼接,将拼接后的融合基因与IL-4基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中.重组子经酶切和测序鉴定后,脂质体转染COS-7细胞,Western blot法检测融合基因的表达,ELISA法检测IL-4表达.结果 核酸序列测定表明克隆的融合基因和IL-4基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot和ELISA显示在COS-7细胞中均可检测两个目的 基因的表达.结论 两种GAD 65片段与IL-4共表达DNA疫苗均成功构建,为1型糖尿病的预防研究提供了实验基础.