锌转运体8自身抗体的放射配体检测法

摘要

目的 建立锌转运体8自身抗体(ZnT8A)的放射配体检测法(RLA). 方法 采用重组人ZnT8质粒,经试管内转录与翻译,获得35S- ZnT8抗原,35S-ZnT8与血清在自制旋转孵育器上旋转温育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物.免疫复合物经TBST缓冲液洗涤后,用多功能闪烁发光分析仪检测沉淀物放射性计数值.参加国际糖尿病免疫学会(IDS)和美国疾病预防控制中心联合举办的第六次糖尿病自身抗体国际标准化评估(DASP 2009),评价该方法的敏感性和特异性.检测429例1型、855例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步评价其临床应用价值. 结果 该方法批内CV 3.9%～9.8%,批间CV4.3%～13.8%; DASP 2009显示,该方法敏感性66%,特异性100%.受试者操作特性曲线(ROC)分析显示,曲线下面积为0.879±0.034;该方法阳性阈值ZnT8A指数为0.011(405名正常人的99%百分位点),检测1型糖尿病患者阳性率24.0%,高于初诊2型糖尿病患者1.3%和健康人0.99%(P均＜0.01). 结论 建立的RLA法检测ZnT8A敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于自身免疫糖尿病的诊断与分型.