外源性重组蛋白Wnt3a对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

摘要

目的:体外研究外源性重组蛋白Wnt3a对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响.方法:常规分离培养人骨髓间充质干细胞,检测其克隆形成能力,并对其分子表型、成骨、成脂分化能力进行鉴定.重组蛋白Wnt3a以10、50、100 ng/ml浓度加入培养液中,MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力,Real Time-PCR检测细胞周期蛋白(Cycling D1,CCND1)mRNA的表达.结果:分离培养出的骨髓间充质干细胞具有克隆形成能力,成骨、成脂分化能力,阳性表达CD9O(97.4%)、CD105(94.9%)、STRO-1(14.5%)、CD146(21.2%),阴性表达CD34(1.7%)、CD45(1.2%).MTT检测结果显示Wnt3a干扰组3、5、7、9 d OD值均高于对照组,流式细胞周期检测结果显示Wnt3a干扰组处于增殖期的细胞比例高于对照组,Real Time-PCR结果显示Wnt3a干扰后CCND1的表达高于对照组.结论:重组蛋白Wnt3a促进了骨髓间充质干细胞的增殖,并且在0～100 ng/mL范围内增殖能力随浓度增加而增强.