山羊干扰素-γ的克隆、原核表达及其抗血清的制备

摘要

应用RT-PCR方法从免疫过山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊干扰素-γ(IFN-γ)基因,经序列测定,其开放阅读框架共有501bp,推测其分子质量(MW)为19.327KD。该基因与GenBank发表的山羊干扰素-γ基因序列(U34232)比较,核苷酸序列同源性为99.4%。经SignalP3.0分析表明,前23个氨基酸为信号肽序列。将信号肽序列去除并克隆到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果表明该基因在大肠杆菌中以包涵体形式融合表达。用ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化并免疫新西兰兔,制备了兔抗山羊IFN-γ多克隆血清。经WesternBlot鉴定,多克隆抗血清可与纯化的山羊IFN-γ蛋白发生特异性反应,说明该重组蛋白具有抗原活性,为我们进一步研究其在疾病诊断和免疫评价方面的应用奠定了基础。