成人胰腺来源的巢蛋白阳性干细胞的体外培养

摘要

目的:建立成人胰腺来源的巢蛋白阳性干细胞的分离和体外培养技术.方法:将胰腺组织剪碎至约1mm3大小,胶原酶V(0.5mg/ml,1ml/g胰腺组织)消化15min.1000rpm离心,5min弃上清,加入冷(0-4℃)Hank's液并吹打.再次离心后,弃上清,加入4℃RPMI 1640后过150目网,800rpm离心3min,弃上清.加含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,接种于经1%刀豆蛋白A处理的培养皿,在37℃,5%CO2培养箱中静置培养24h后,吸出未附壁的细胞及细胞团,加含10%胎牛血清、11.1mol/L葡萄糖、20ng/ml表皮生长因子及20mg/ml碱性成纤维生长因子的DMEM培养基,接种于未经刀豆蛋白A处理的培养皿,每3-4天换液1次.结果:未附壁的细胞及细胞团4h后开始附壁,并可见细胞从附壁的细胞团中缓慢向外生长,4天后,形成单层细胞,附壁的单层细胞呈梭形,细胞密度达70-80%汇合时,用兔抗人巢蛋白单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,其中95%以上细胞为阳性.结论:成人胰腺组织中可以分离出巢蛋白阳性的干细胞,此细胞可以在体外增殖.