产KP C型碳青霉烯类耐药肠杆菌对头孢他啶-阿维巴坦的体外敏感性变化的机制分析

摘要

目的 检测未接受过头孢他啶-阿维巴坦(ceftazidime-avibactam,CAZ-AVI)治疗的产KPC型碳青霉烯类耐药肠杆菌(KPC-producing carbapenem-resistant Enterobacteriacea,KPC-CRE)对CAZ-AVI的体外敏感性;研究产KPC型肺炎克雷伯菌(KPC-producing Klebsiella pneumoniae,KPC-KP)对CAZ-AVI敏感性降低机制.方法 收集2016年10月—2018年6月苏州大学附属第二医院非重复CRE临床菌株70株;全自动微生物分析仪进行菌种鉴定,并用16S rRNA PCR扩增及测序进行验证;革兰阴性菌药敏板及微量肉汤稀释法进行药敏分析;改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)对CRE菌株进行产碳青霉烯酶表型检测;PCR结合Sanger测序检测耐药相关基因;多位点序列分型分析KPC-CRE的序列分型(ST);以CAZ-AVI最低抑菌浓度(MIC)≤2/4 mg/L的KPC-KP为对照组,以CAZ-AVI MIC为4/4 mg/L的KPC-KP为实验组,采用qRT-PCR检测blaKPC相对拷贝数及表达量.结果 70株CRE菌株中49株(70.0％)为产碳青霉烯酶阳性,其中26株携带blaKPC;25株KPC-KP中23株为ST11;26株KPC-CRE对CAZ-AVI敏感率为100％,其中1株CAZ-AVI敏感性降低KPC-KP,MIC为4/4 mg/L;CAZ-AVI敏感性降低KPC-KP携带野生型blaKPC-2以及2种ESBLs基因blaCTX-M-65和blaTEM-1,外膜蛋白OmpK35缺失,OmpK36功能缺陷;其blaKPC相对拷贝数及表达量均高于对照组.结论 CAZ-AVI对未接受过CAZ-AVI治疗的KPC-CRE具有很强的体外抑制作用;blaKPC拷贝数和/或表达量增加合并ESBLs以及外膜蛋白缺失和功能缺陷可能会导致KPC-KP对CAZ-AVI敏感性降低.