碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子特征分析

摘要

目的 分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用.方法 收集2012-2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型.用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(AmpC)编码基因及外排泵基因acrAB-tolC、kexD、kdeA、kpnEF和kpnGH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白OmpK35和OmpK36的表达.结果 碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿雏巴坦等有很好的敏感性;blacTx-M和blaSHV检出率依次为76.9％和57.7％;外膜孔蛋白OmpK35和OmpK36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7％和19.2％;80％以上的细菌中存在acrAB-tolC、kexD、kdeA、kpnEF和kpnGH基因;CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用.结论 替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物.CRKPPC菌株中存在AmpC、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白OmpK35和OmpK36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值.