肾移植术后尿液中巨细胞病毒DNA的定量测定

摘要

@@人类巨细胞病毒(CMV)感染能引起移植物的慢性排异，正确诊断及治疗CMV感染可有效提高移植物的存活率，减少医疗费用。然而在众多CMV感染的实验室检查中，究竟哪一种方法最可靠一直存有争议。本项目采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测CMV DNA，报道如下。rn1 材料和方法rn1.1 92名1997年1月至2000年5月在我院接受肾移植的患者，移植时间2个月～40个月。收集中段晨尿，临床上有感染症状的患者在抗病毒治疗后反复留取尿标本，共收集标本112份。rn1.2 TagMan和CMV DNA荧光定量试剂由达安基因诊断中心提供。rn1.3 PE5700荧光定量PCR仪和计算机自动荧光检测仪(PE公司)。rn1.4 标本处理留取中段晨尿10 ml密封送检，取1 ml至1.5 ml离心管中，12 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀加生理盐水打匀，15 000 r/min离心5 min，沉淀加50 μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10 min,10 000 r/min离心5 min,取上清液2 μl做PCR反应。rn1.5 PCR扩增及荧光测定取CMV PCR反应管，直接加入处理后样品2 μl，振荡器振荡2～3s混匀，将反应管放入PCR仪，93℃ 2 min预变性，93℃ 45s,55℃ 120 s,共做40个循环。然后通过计算机自动荧光检测CMV DNA含量，结果以基因拷贝数/ml表示。