慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的建立

摘要

目的 建立慢病毒介导且稳定表达病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)蛋白的血管内皮细胞株.方法 以质粒pvIL-6-Flag为模板,PCR扩增vIL-6基因,克隆至慢病毒载体p3 DLV,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,构建含vIL-6基因的重组慢病毒.重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经潮霉素筛选,获得稳定表达细胞株,western blot鉴定vIL-6蛋白的表达.结果 酶切鉴定和基因测序证实长度为615 bp的vIL-6基因成功克隆至慢病毒表达载体；重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为1.0×107 TU/mL.重组慢病毒感染EA.hy926细胞,经潮霉素筛选,形成生长形态良好的单克隆细胞株EA.hy926-vIL-6.western blot鉴定该细胞株可稳定表达vIL-6蛋白.结论 建立了稳定表达vIL-6的EA.hy926细胞株,为进一步研究vIL-6的生物学功能及致病机制提供了细胞模型.