RNA干扰抑制Fas基因的表达对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的影响

摘要

目的 用RNA干扰(RNAi)技术抑制小鼠Fas基因表达,观察其对脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖及FADD-FLIP-TRAFNF-κB信号传导途径的影响,为后续FasL低剂量兴奋效应研究提供实验基础.方法 设计合成靶向小鼠Fas基因的小干扰RNA (siRNA)片段,用脂质体包埋转染bEnd.3细胞;CCK-8法检测细胞增殖；RT-PCR检测bEnd.3细胞Fas mRNA的表达情况；western blot检测Fas、FADD、FLIP、TRAF蛋白表达水平.结果 CCK-8法检测显示,Fas-siRNA组细胞增殖水平与空白对照组比较,无统计学差异(t=1.805,P＞0.05)；RT-PCR结果表明,与空白组的Fas mRNA表达水平比较,Fas-228-、Fas-310-、Fas-427-、Fas-891-siRNA组mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(F=123.127,P＜0.05)；western blot显示,Fas-siRNA组与空白对照组Fas蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(t=12.101,P＜0.01)；Fas-siRNA组FADD、FLIP、TRAF蛋白相对表达水平与空白对照组比较,表达均下调(t=28.315、17.563、8.903,P＜0.05).结论 Fas-siRNA能有效封闭Fas基因的表达,抑制Fas下游信号FADD、FLIP、TRAF蛋白表达.