nalC、mexZ调控基因及oprD基因突变导致头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类中低度耐药

摘要

目的 探讨本地区出现的头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物中低度耐药的原因.方法 收集对头孢他啶和头孢吡肟敏感、对碳青霉烯类药物中低度耐药的铜绿假单胞菌临床分离株,十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察铜绿假单胞菌相对分子量(Mr)为46 000的外膜蛋白OprD的改变.实时荧光定量RT-PCR分析细菌外排系统基因mexA、mexC、mexE和mexX表达情况.PCR扩增oprD基因和外排系统表达调控基因(mexZ、mexR、nalC、nalD和nfxB)并进行测序分析.结果 30株分离菌有26株细菌外膜蛋白在Mr 46 000处有缺失或者减少;根据外膜蛋白表型选择30株细菌中的10株进行基因测序,发现碱基缺失和插入导致移码突变以及碱基的置换导致蛋白质合成的改变.外排系统基因以mexA和mexX速度表达为主,同对伴有少量mexC基因的过度表达.mexA的调控基因主要发生nalC Tyr23→His(TAC→ CAC)和mexRVal 26→Glu (GTG→GAG),mexX的调控基因mexZ发生Pro136→Ala(CCA→GCA)的突变.结论 该表型铜绿假单胞菌存在由oprD基因置换、缺失以及插入导致的外膜蛋白减少或缺失,nalC、mexZ调控基因突变引起外排系统mexAB-OprM和mexXY-OprM表达增加,可能是共同引起头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物中低度耐药的重要原因.