烟曲霉果胶裂解酶A重组蛋白的原核表达及抗原性分析

摘要

目的 制备烟曲霉果胶裂解酶A(pectate lyase A,PlyA)重组蛋白质并鉴定其抗原性.方法 对编码烟曲霉plyA基因的DNA序列进行优化和人工合成,序列分析验证,然后连接至表达载体pET-28a(+),并转化大肠埃希菌(E.coli) BL21(DE3).用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白质表达,SDS-PAGE电泳分析重组蛋白质,并用Talon亲和层析柱纯化,western blot分析重组蛋白质与抗组氨酸标签蛋白(His-tag)单克隆抗体和侵袭性曲霉病患者血清中相应抗体的反应性.结果 克隆出经过修饰改良的、适用于原核细胞表达的烟曲霉plyA基因的DNA序列;获得相对分子量约35 300的PlyA重组蛋白质;western blot结果显示该蛋白质可被抗His-tag抗体识别,并与曲霉病患者血清中抗体发生特异性免疫反应.结论 成功表达烟曲霉PlyA重组蛋白质,初步证明该蛋白质的抗原性良好.