高效液相色谱-串联质谱法测定盐酸二甲双胍及其制剂中痕量N-亚硝基二甲胺

摘要

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测盐酸二甲双胍原料和制剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)含量的方法.样品以水为提取溶剂,经涡旋混匀、恒温振荡、高速离心、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析.采用ACE EXCEL 3 C18-AR色谱柱(150 mm×4.6 mm,3μm)分离,流动相为均含0.1％甲酸的水和甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温40℃,自动进样器温度10℃.采用阀切换技术保护质谱仪,设置六通阀切换使保留时间2.85～7.00 min的流动相进入质谱,其余时间流动相进入废液.质谱部分采用大气压化学电离(APCI)源,在正离子、MRM模式下扫描,雾化器流量为3 L/min,加热器流量为10 L/min,接口温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,加热块温度为400℃,干燥器流量为10 L/min.NDMA定量离子对为m/z 75.0→43.1,碰撞能量(CE)为-17.0 eV,定性离子对为m/z 75.0→58.2,CE为-16.0 eV.采用外标法定量.对方法进行了详细的方法学验证,结果表明,该法专属性良好,溶剂和辅料对NDMA测定无干扰.NDMA峰面积与其质量浓度在1.00～100.00 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数(r)>0.9999;低、中、高3个水平下NDMA的回收率为94.55％～114.67％,RSD为4.73％～13.46％;检出限和定量限分别为0.20 ng/mL和1.00 ng/mL;NDMA在自动进样器放置0、8、24 h的峰面积RSD为2.08％.使用该方法对113批盐酸二甲双胍原料和制剂供试品中的NDMA进行测定,发现原料药中NDMA检出量不超限,但有8批二甲双胍制剂超过了限度.该法灵敏、准确,操作简便,可用于盐酸二甲双胍原料及制剂中的NDMA检测.