PCSK9对单核巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白的影响及其机制

摘要

目的 探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）对单核巨噬细胞THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）介导的氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）摄取的影响及机制。方法 用丙二醇甲醚醋酸酯孵育THP-1单核细胞48 h诱导分化成巨噬细胞,人重组PCSK9蛋白预处理巨噬细胞1 h后,与ox-LDL孵育24 h诱导为泡沫细胞,油红O染色观察对照组（泡沫细胞）与不同浓度人重组PCSK9蛋白孵育组细胞内脂质蓄积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）与Western blot法检测LOX-1 mRNA和蛋白表达。荧光显微镜观察对照组（巨噬细胞）、PCSK9蛋白单独孵育组和PCSK9蛋白与抗LOX-1抗体、IgG抗体共孵育组对Dil标记氧化低密度脂蛋白（Dil-ox-LDL）的摄取情况。检测对照组（泡沫细胞）与PCSK9蛋白组对Toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB）、环氧合酶-2（COX-2）mRNA和蛋白表达影响,以及PCSK9蛋白与TLR4抑制剂（TAK-242）共同孵育组NF-κB mRNA和蛋白表达影响,与NF-κB抑制剂（PDTC）共同孵育组COX-2 mRNA和蛋白表达影响,与COX-2抑制剂（NS-398）或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶抑制剂（DPI）共同孵育组活性氧簇（ROS）生成的影响。检测对照组（PCSK9蛋白预处理泡沫细胞）和PCSK9蛋白分别与TAK-242、PDTC、NS-398、DPI共同孵育组LOX-1 mRNA和蛋白表达。结果 （1）PCSK9组细胞内脂滴综合光密度、总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯/总胆固醇比值均高于对照组（P均＆0.05）,PCSK9组LOX-1 mRNA和蛋白表达均高于对照组（P均＆0.05）。（2）PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组巨噬细胞Dil-ox-LDL荧光强度高于对照组（P均＆0.05）,PCSK9+抗LOX-1抗体组荧光强度低于PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组（P均＆0.05）。（3）PCSK9组TLR4、NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均高于相应对照组（P均＆0.05）,PCSK9+TAK-242组TLR4、NF-κB与PCSK9+PDTC组NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均低于相应PCSK9组（P均＆0.05）。PCSK9组ROS水平高于对照组（P＆0.05）,PCSK9+NS-398和PCSK9+DPI组ROS水平均低于PCSK9组（P均＆0.05）。（4）TAK-242、PDTC、NS-398、DPI分别与PCSK9蛋白共孵育组的LOX-1 mRNA和蛋白表达均低于PCSK9蛋白单独孵育组（P均＆0.05）。结论 PCSK9可能通过THP-1源性巨噬细胞TLR4/NF-κB/COX-2/ROS途径调节LOX-1介导的ox-LDL摄取。