n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制

摘要

目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）灌流后BK通道开放概率（NP0）。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电压60 mV条件下,EPA浓度为0、10、30、100、300和1 000 pmol/L时,BK通道NP0分别为0.061 6±0.093 8、0.109 0±0.095 7、0.130 3±0.096 4、0.225 0±0.180 4、0.380 3±0.247 2和0.408 0±0.270 5,呈浓度依赖性增加（P＜0.05,n=4）;而DHA浓度为0、0.01、0.1和1μmol/L时,BK通道NP0分别为0.120 0±0.008 6、0.119 0±0.073 4、0.125 0±0.092 1和0.289 0±0.061 6,NP0无明显增加（P＞0.05）;继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、7.5和10μmol/L时,BK通道NP0分别为0.632 6±0.047 8、1.098 0±0.064 3、1.158 7±0.067 6和1.164 0±0.092 6呈浓度依赖性增加（P＜0.05,n=4）。BK通道α亚单位蛋白表达分别为0.792 9±0.179 4、0.776 0±0.059 9和0.790 5±0.059 6（P＞0.05,n=24）,β1亚单位蛋白表达分别为0.897 1±0.297 6、1.140 7±0.151 6和1.239 2±0.233 7（P＞0.05,n=24）。未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0.640 3±0.247 0、0.630 1±0.229 0和0.921 7±0.090 7（P＞0.05,n=24）,β1亚单位基因表达分别为0.853 1±0.368 7、0.991 9±0.225 0和1.086 5±0.363 2（P＞0.05,n=24）。结论 n-3 PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活,而是通过与BK通道作用后直接激活,从而扩张冠状动脉。