DNA引物酶抑制剂筛选方法的建立及应用

摘要

目的：建立ＤＮＡ引物酶抑制剂的筛选方法，并应用于大量筛选，找出对ＤＮＡ引物酶有抑制作用的抗癌药物或先导化合物。方法：以小鼠艾氏腹水癌细胞破碎液为材料，过ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱，提取分离ＤＮＡ引物酶，用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶Ⅰ延长引物法检测ＤＮＡ引物酶的活性。并在此反应液中加入化合物检测对ＤＮＡ引物酶活性的抑制作用，以激活的小牛胸腺ＤＮＡ为模板排除化合物对大片断ＤＮＡ多聚酶Ⅰ的抑制作用。结果：部分纯化的ＤＮＡ引物酶比活性为８７５３Ｕ／ｍｇ，酶的总获得率为２２１％。在１００μｇ／ｍｌ浓度下，氯霉素和鞘氨醇对ＤＮＡ引物酶活性抑制率分另为７１２％±３７％和８３０％±５４％。结论：该方法已经建立，大量筛选发现非抗癌药物的氯霉素和鞘氨醇两种化合物对ＤＮＡ引物酶活性有抑制作用。临床常用的抗癌药物未发现对此酶活性有抑制作用。