抗人血管内皮生长因子嵌合抗体在真核细胞中的高效表达

摘要

目的：在中国仓鼠卵巢（ Chinese hamster ovary, CHO）细胞中高效表达有活性的抗人血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）嵌合抗体，并探索获得最佳表达的途径。方法：采用一种新型的基因工程抗体真核高效表达载体系统，将抗 VEGF嵌合抗体轻、重链基因导入二氢叶酸还原酶缺陷型 CHO细胞，筛选表达抗 VEGF嵌合抗体的克隆，再进行递增浓度的氨甲喋呤 (methotrexate, MTX)加压扩增表达。采用 ELISA检测所表达的嵌合抗体的生物学特性和产量。结果：采用三种不同的筛选加压扩增表达方法获得的结果有差异，其中采用每轮加压扩增表达后进行亚克隆的方法获得了高表达产量的克隆，产量可达 28μ g/ml。 ELISA结果证实所表达的抗体为特异地与 VEGF结合的、含人抗体恒定区的抗 VEGF嵌合抗体。结论：成功地在真核细胞中高效表达了有活性的抗 VEGF嵌合抗体，为下一步该嵌合抗体的临床试用奠定了重要的基础，并探索出该表达系统最佳的筛选加压扩增表达方法。