一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析

摘要

背景与目的:肺癌细胞的多药耐药(multi-drugresistance,MDR)是药物治疗失败的重要原因,但其机制尚未完全清楚。我们已经通过SSH发现了1条新的耐药相关基因片段,经检索GenBank,发现其与2001年4月公布的一条新的基因序列BC006151同源性高达99%。本研究旨在克隆该基因的全长,并检验该基因在几种肺癌细胞株中的表达,为进一步研究其功能和调控奠定基础。方法:根据BC006151基因序列设计引物,通过RT-PCR证实肺腺癌MDR细胞SPC-A-1/cDDP确实包含BC006151基因后,扩增该基因全长cDNA,通过测序对所得序列进行分析,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行预测。应用半定量RT-PCR方法检验小细胞肺癌SH77、大细胞肺癌H460、肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1/cDDP等细胞株中该基因mRNA的表达。结果:成功克隆了BC006151基因的全长cDNA片段,长1298bp,它具有完整的阅读框和编码区,并与经SSH获得的片段有极高的同源性。该基因在MDR细胞株SPC-A-1/cDDP的表达明显高于其亲代细胞株;SPC-A-1表达高于H460,SH77未见表达。结论:BC006151基因是与cDDP致肺腺癌MDR密切相关的一条新基因。该基因全长cDNA片段的克隆将有助于阐明其在肺癌MDR发生中的作用。