反义PTTG真核表达载体对人卵巢癌细胞SK-OV-3恶性表型的抑制作用

摘要

背景与目的:垂体肿瘤转化基因(pituitarytumortransforminggene,PTTG)是一个新的原癌基因,具有多种促肿瘤生长与转移的作用。目前研究多集中于PTTG在各种肿瘤组织中的表达及其相关的调控机制,而针对其反义阻断可能性的报道较少。本研究中,我们通过构建携带能够表达全长反义PTTGmRNA的真核表达载体,观察其对人卵巢癌细胞株SK-OV-3的反义阻断效应。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆全长PTTG,反向插入真核表达载体pcDNA3.1;用脂质体将重组载体转染SK-OV-3细胞,G418筛选阳性克隆后,Westernblot检测PTTG蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)表达的改变,MTT法检测细胞增殖情况,并利用软琼脂糖集落形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:筛选出稳定表达重组pcDNA3.1-PTTGas的SK-OV-3细胞;转染细胞组较未转染细胞组的PTTG、bFGF表达分别减少了61.5%和52.3%;转染细胞增殖明显增强;转染细胞在软琼脂中的集落形成数(2.4±0.8)明显低于未转染组和转染空白质粒对照组(23.3±5.7和21.5±7.9)(P<0.01)。结论:反义PTTG真核表达载体作为一种新的工具,为针对PTTG的肿瘤基因治疗提供了可能性。