膀胱癌相关蛋白基因对HeLa细胞增殖的抑制作用

摘要

背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测54例宫颈癌组织和25正常宫颈组织中BLCAP基因的表达情况。制备BLCAP全长cDNA并克隆到真核表达载体pLXSN上,稳定转染至宫颈癌细胞系HeLa中,细胞计数方法和克隆形成实验观察稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞的细胞形态、细胞增殖及集落形成能力;利用DNAladder检测BLCAP基因引起HeLa细胞凋亡情况;裸鼠体内抑瘤实验观察BLCAP基因的抑瘤作用。结果:BLCAP在宫颈癌组织中不表达或低表达,与正常宫颈组织相比明显降低;转染BLCAP基因的HeLa细胞倍增时间为69.4h,较未转染HeLa细胞(27.5h)和转染空载体的HeLa细胞(30.2h)明显延长,差异有显著性(P﹤0.05);细胞同步对比实验显示,转染BLCAP基因的HeLa细胞的克隆形成率明显低于未转染HeLa细胞(t=5.98,P<0.01)和转染空载体的HeLa细胞(t=4.69,P﹤0.01);HeLa细胞在转染BLCAP基因后出现了DNA梯形条带。将转染BLCAP基因的HeLa细胞、转染空载体的HeLa细胞和未转染的HeLa细胞分别注射入BALB/c裸鼠体内,30天后处死动物,剥离肿瘤组织并称重,各组平均瘤重分别为1.015g、1.612g和1.530g,转染BLCAP基因的细胞抑瘤能力与两对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤病理切片结果显示,稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞所成肿瘤组织,癌组织被纤维组织包裹,边缘整齐,未侵犯肌层和脂肪组织,部分癌巢边缘癌细胞可见散在类似凋亡细胞的细胞群。而未转染质粒组及转染空载体pLXSN质粒组所成肿瘤组织癌组织突破肌层呈浸润性生长,癌巢边缘癌细胞病理性核分裂像多见。结论:BLCAP基因在宫颈癌组织中表达下调,对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,为宫颈癌相关候选抑癌基因。