水泡口炎病毒M蛋白对小鼠Lewis肺癌LL/2c细胞增殖与凋亡的影响

摘要

背景与目的:水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)具有明显的抗肿瘤作用,在人的A549肿瘤模型和小鼠的LL/2c模型中已取得了明显的治疗效果。但复制完全型病毒在临床应用中存在着一定的安全隐患,且研究报道VSV抗肿瘤作用与其基质蛋白(matrix protein,M蛋白)有关。本研究旨在探讨VSV-M蛋白对小鼠的LL/2c肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用分子克隆技术构建VSV-M蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-M,经酶切、PCR、测序鉴定得到阳性重组子,体外转染LL/2c细胞,RT-PCR、Western blot检测M蛋白的表达。采用噻唑蓝(MTT)法检测了M蛋白质粒对LL/2c肿瘤细胞增殖的影响。DNALadder、Hoechst33528染色检测LL/2c肿瘤细胞凋亡。结果:构建了VSV-M蛋白真核表达质粒pcDNA3.1-M。重组质粒体外转染LL/2c细胞后,检测到M蛋白的表达;倒置显微镜下观察到细胞形态学的改变,且48h后细胞生长抑制明显,抑制率达41.3%(P0.05)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder形成,Hoechst33528染色检测到LL/2c细胞凋亡,细胞核改变。结论:VSV-M蛋白可抑制小鼠LL/2c细胞增殖,并诱导细胞凋亡。