不同复温温度对-10℃处理的体外培养人成纤维细胞形态和Ⅰ型胶原代谢的影响

摘要

目的探讨不同复温温度对低温处理人成纤维细胞形态和Ⅰ型胶原代谢的影响.方法将体外培养的人成纤维细胞制成悬液后接种于培养皿中,随机分为对照组、20℃复温组、37℃复温组.将两个复温组培养细胞渐冷冻至-10℃制成冻伤模型,然后各自于20、37℃下复温,再与对照组一起继续培养,于伤前及伤后即刻、24、48、72、96 h进行观察,每组各时相点9个培养皿.采用噻唑蓝法观察细胞活力的变化,以波长570 nm下的吸光度(A)值表示;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫组织化学染色法及IMAGE-J图像分析软件测定细胞内胶原含量变化,以灰度值表示;双抗夹心亲和素-生物素酶联免疫吸附测定法测定细胞外胶原含量,以A值表示.结果20℃复温组细胞活力伤后先降低后升高,各时相点明显低于伤前值(0.95±0.16,P＜0.05或0.01);细胞伤后即刻脱水,胞浆丢失、核浆比例增大,伤后72、96 h细胞增生活跃,核分裂相增多,部分细胞出现漂浮后再贴壁现象,细胞排列杂乱;细胞外胶原含量较伤前值(96.4±2.9)呈先升高后降低再缓慢升高的趋势,细胞内胶原含量则较伤前值(0.047 9±0.002 7)呈先降低后逐渐升高趋势,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).37℃复温组伤后细胞活力各时相点与伤前值相近(P＞0.05);与对照组比较,其细胞形态、胶原代谢基本无变化(P＞0.05).结论低温处理后细胞脱水是一种保护机制,适宜的复温条件能使细胞复苏;与20℃相比,37℃复温对细胞的损伤较轻.