反义miR-221/222上调p27kip1对MCF-7乳腺癌细胞系的放射增敏作用

摘要

目的 探讨敲低miR-221/222表达上调p27kip1对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响.方法 经生物信息学分析查询miR-221/222成熟体序列和它们与p27kip1的关系.脂质体共转染反义寡聚核苷酸(反义miR-221/222)后,用Northern blot法检测转染后MCF-7细胞miR-221、miR-222表达水平;将实验细胞分为6组:对照组、对照照射组、无义序列组、无义序列照射组、反义miR-221/222共转染组和反义miR-221/222共转染照射组.用MTT法检测细胞增殖及放射协同作用,流式细胞仪分析细胞周期,克隆形成实验检测细胞增殖,Western blot分析p27kip1蛋白的表达变化.数据间的方差分析采用F检验;两两比较采用LSD-t检验.结果 经生物信息学分析显示miR-221/222成熟体序列的种子序列几乎一致,p27kip1是miR-221/222的靶基因.Northern blot显示反义miR-221/222共转染组miR-221、miR-222的表达水平明显下降(miR-221:P=0.000;miR-222:P=0.000).对照组及无义序列组之间miR-221、miR-222表达水平的差异无统计学意义(miR-221:P=0.371;miR-222:P=0.284).MTT结果显示转染后第4天共转染组肿瘤细胞生长抑制效果最好,细胞增殖率明显低于对照组和无义序列组(P=0.000),但与放射治疗无协同作用(P=0.091).流式细胞术检测可见共转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞(P=0.000).经放射治疗后,可明显降低S期比例(P=0.002).克隆形成实验表明反义miR-221/222可增加MCF-7细胞的放射敏感性.Western blot显示反义miR-221/222共转染组的p27kip1蛋白表达明显上调(P=0.000).结论 反义miR-221/222通过上调p27kip1蛋白表达可以增加MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性.