TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

摘要

目的 研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下（TK/GCV系统）联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk，制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序，培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株，流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态，筛选稳定细胞系，MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果 成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk，通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株，获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63 （tk＋）呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测，当GCV浓度为10 μg/ml时，骨肉瘤MG-63 （tk＋）细胞株的生长受到抑制，同时测得顺铂的最低有效浓度为1 μg/ml。当顺铂与GCV （5 μg/ml）联合应用时，顺铂的有效浓度可降为0.25 μg/ml，并对MG-63 （tk＋）细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用，并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性，降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。