酵母完整细胞快速高效转化法

摘要

通过研究影响转化效率的诸因素,最终找到一种快速、高效酵母完整细胞转化法。整个转化步骤能在1.5h内完成。在实验中发现:小牛胸腺DNA的加入,在加入DNA后随即加入PEG4000;将42℃热冲击时间从5min延长到25min;热冲击后直接将转化混合物涂布到选择性平板上能得到高效转化效率。所用四种类型质粒的转化效率如下:YRp:3.5—7.2×10~4(线性pCN60/BamHI:1.6×10~6);YEp:1.7—2.6×10~4(线性YEp13/BamHI:8×10~4);YCp:3.7×10~4;YIp5/Stu I:7.6×10~3。用快速法检测的7株受体菌的转化能力都达到10~4个转化子/μg DNA。