重组人sBLyS表达纯化条件的优化、理化特征及生物功能研究

摘要

构建了原核表达质粒p ET-30a(+)/sBLyS,转化大肠杆菌BL21(λDE3),IPTG诱导表达的重组蛋白以可溶部分和包涵体两种形式存在,为了提高可溶部分重组蛋白的比例,确定16℃为诱导表达的温度,最佳表达时间为12h.在此条件下大规模诱导表达,经Ni2+亲和层析获得重组人sBLyS.重组蛋白的等电点约为7.1～7.3,活性状态时是非共价连接的同源三聚体.MTT法测重组人sBLyS对B淋巴细胞的增殖作用结果表明,B细胞经抗IgM原血清活化后,它的增殖程度在一定的重组人sBLyS浓度范围内随其浓度的增加而提高,sBLyS刺激时间对B细胞增长也有显著影响,sBLyS以2μg/mL刺激3d B淋巴细胞的增殖达最大.