利用卵胞浆精子注射(ICSI)技术生产转基因小鼠

摘要

在掌握小鼠ICSI技术的基础上,进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究.来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验.解冻精子与DNA混匀1 min后,精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质中.精子头与pEGFP-N1环状DNA共注射生产的ICSI受精卵,在CZB溶液中培养至囊胚期时,39.1%(9/23)的囊胚表达GFP基因.精子注射后6h,直接移植ICSI受精卵后,7只妊娠受体一共产仔30只,效率为23.8%(30/126).Southern blot分析其中16只小鼠发现,3只(18.8%)转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin基因,它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组(阳性效率为33.3%,3/9),相反,精子与环状质粒DNA共注射生产的7只ICSI后代中,没有检测到外源基因.转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代.结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠,宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因.