青花菜雄性不育相关基因BoDHAR的克隆与表达分析

摘要

以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针,通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索,经人工拼接、RT-PCR、PCR克隆与序列分析,获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHAR dehydroascorbate reductase基因的cDNA与DNA全长序列,命名为BoDHAR.并利用双链接头介导PCR的染色体步行技术(genome walking)克隆了其上游644bp的5'端序列.所获的BoDHAR基因全长1486bp,存在两个内含子,DNA编码区序列633bp,编码210个氨基酸;序列分析表明:BoDHAR与同源基因AT1G19570.1 cDNA序列有82.3%的一致性,推导的氨基酸序列有79.6%的一致性;编码的水溶性蛋白存在多个磷酸化位点;5'端上游区存在明显的转录调控序列.半定量RT-PCR结果表明:BoDHAR在可育系花蕾中的表达量明显高于不育系花蕾,在花药中的表达明显高于其它部位.