青花菜花药发育相关基因BoDHAR及其启动子区的克隆与分析

摘要

本文以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针,通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索,经人工拼接、RT-PCR、PCR克隆与序列分析,获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHAR(dehydroascorbatereductase)基因的cDNA与DNA全长序列,命名为BoDHAR.并利用双链接头介导PCR的染色体步行技术(genomewalking)克隆了其上游644bp的启动子序列.BoDHAR基因全长842bp,存在两个内含子,cDNA序列633bp,编码210个氨基酸;序列分析表明:BoDHAR与同源基因AtlGl9570.1cDNA序列有82.3﹪的一致性,推导的氨基酸序列有79.6﹪的一致性;编码蛋白为水溶性,存在多个磷酸化位点;启动子区存在明显的转录调控序列.不同器官与花的不同组织的RT-PCR结果表明:BoDHAR在花药中的表达明显高于其它部位.