毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析

摘要

为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS-PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastoris GS115/HWTX-Ⅰ表达的不均一产物进行了分离、纯化和鉴定,并对不均一产物的N端和C端进行测序,结果表明:表达产物的不均一性主要体现在重组HWTX-Ⅰ的N端信号肽加工的不完全以及C末端的内部降解.生物学活性分析表明该不均一产物的活性仅为天然HWTX-Ⅰ活性的30%.同时,对如何避免不均一性表达产物的产生提出了相应的对策.