栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质

摘要

栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基).摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×105u/L、7.38 x 104u/L[以2,2'-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸(ABTS)为底物].在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×105u/L,同时其生产周期降至7.5d.两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3～10的范围内均稳定.然而,rLacDx对底物ABTS的比活力(1761u/mg)高于rLacDe(1122u/mg),其表现Km值(427μmol/L)低于rLacDe(604μmol/L).