Hepcidin的基因克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

摘要

根据已知hepeidin氨基酸序列,参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,设计合成了hepcidin目的基因.所合成的hepcidin基因全长96bp,其5'端引入KEX2基因产物(Kex2)的特异性识别位点序列,以保证表达产物具有天然N端.通过基因重组的方法将hepcidin基因克隆到pPicZaA裁体中,构建了分泌型重组酵母表达栽体pPICZaA-Hepc,经电转至毕赤酵母GS115中表达.使用浓度高达1500 gg/mL的Zeoein筛选得到高拷贝插入GS115菌株,经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液有明显的hepcidin表达,表达量达到100 mg/L.初步抗茼特性研究表明,该表达产物对枯苹芽孢杆菌有明显的抑菌作用,而对大肠杆菌抑菌效果不明显.