TAIL-PCR的改良及其在分离小麦基因启动子中的应用

摘要

在经典TAIL-PCR(Thermal asymmetric interlaced PCR)的基础上,对其进行了如下四处改进:用10个碱基的RAPD引物代替16个碱基的随机兼并引物作为PCR中的随机引物;将较低特异性循环的复性温度由44℃降至29℃;增加5个高特异性反应循环,减少5个较低特异性反应循环;用单引物对第三轮PCR产物进行初步鉴定.利用改进的TAIL-PCR方法分离了小麦X基因的5'未知的侧翼序列,与GUS基因融合后转入拟南芥,通过组织化学检测分析表明分离到的5'侧翼序列具有启动子功能,同时说明改进的TAIL-PCR能更好地应用到较复杂基因启动子的分离.