基因修饰对鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗表达效力的影响

摘要

DNA 疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F48E9 株的 HN 基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较.利用分子生物学软件将 NDV F48E9 株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在HN基因的5'端加上同样已替换密码子的禽流感病毒 HA蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达.修饰后HN基因命名为 SoptiHN,剔除信号肽的 HN 基因命名为optiHN. 将 SoptiHN、optiHN 和 F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体 pVAX1 和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列 CpG-ODN 的载体 pVAX1-CpG 中,将他们分别命名为 pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN 和pV-HN、pVC-HN,用这些质粒转染 293T 细胞,48小时后间接免疫荧光和 Western blotting 检测细胞中瞬时表达的 HN蛋白.结果显示,与未经修饰的HN基因相比,修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量.