口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性

摘要

以O型、A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VPl全基因和AsiaI型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因.构建了0型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)为基因佐荆,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因.将构建好的表达盒OAAT与SEA融合表达基因克隆至真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建了口蹄疫三价基因佐剂DNA疫苗pEA.经Westernblotting和IFA检测,目的蛋白在Hela细胞中获得正确表达.小鼠免疫实验表明,pA和pEA免疫组的血清抗体均能分别与O型、A型和AsiaⅠ抗原反应,与对照组相比差异较显著,且pEA免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pA免疫组;同时pA和pEA免疫小鼠细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10较对照组显著提高,且pEA免疫组的IL-2、IFN-γ和IL-4水平明显高于pA免疫组.用O/NY00和Asia1/YNBS/58株FMDV进行豚鼠攻毒免疫保护试验,结果表明O型和Asial型FMDV二联灭活疫苗免疫组均获得完全保护,pA免疫组均获得2/4保护,pEA免疫组均获得3/4保护,而pVAX1和PBS免疫组完全没有保护.实验结果表明,SEA与OAAT融合表达蛋白具有较好免疫原性,且SEA可以作为DNA疫苗的有效基因佐剂.